《表4 乙醇与Na2CO3质量分数对SPG的影响》

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《双水相体系萃取分离发酵液中的裂褶菌多糖》

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由表1～表4可见，在实验所选双水相体系条件下，分配系数KSPG都远小于1，这说明采用PEG/无机盐、乙醇/无机盐的双水相体系萃取裂褶菌多糖，SPG主要集中在下相，这与已报道过用双水相提取多糖的结果一致[8，12]。这是因为PEG6000和乙醇形成的上相存在相对较强的疏水作用和亲和作用，无机盐形成的下相则存在相对较强的静电作用，而目标产物SPG是一种水溶性多糖，有较高的极性，因此富集在下相。4种双水相组成中，按每种组成SPG最大萃取率从大到小依次为:乙醇/K2HPO4（30%乙醇/16%K2HPO4，YSPG为96.20%±0.07%）>乙醇/Na2CO3（25%乙醇/20%Na2CO3，YSPG为95.65%±0.01%）>PEG6000/（NH4）2SO4（20%PEG600/30% （NH4）2SO4，YSPG为95.39%±0.03%） >乙醇/（NH4）2SO4（20%乙醇/23% （NH4）2SO4，YSPG为90.54%±0.10%） 由此可以看出，本实验中选择的4种双水相组成分离SPG的最大萃取率均可达90%以上，与已报道过的传统水提法[13]、微波辅助法[14]、超声波辅助法[15]等来提取SPG相比，其提取率有了明显的提高。虽然乙醇/K2HPO4体系有一浓度组合SPG萃取率最大，但SPG分配系数在0.2左右；而乙醇/Na2CO3组合，其SPG分配系数几乎都在0.1左右，并且其最大萃取率也可达95%以上，说明Na2CO3对于SPG在下相富集效果比K2HPO4更好，有利于SPG的分离。PEG/（NH4）2SO4体系SPG最大萃取率与乙醇/Na2CO3体系的最大萃取率相差不大。考虑到PEG6000黏度较大，无机盐的浓度也较高将导致后续分离难且无机盐回收的成本增大；而乙醇/Na2CO3体系所用试剂无毒、绿色环保、价格较低、后续分离方便，此外，短链醇/无机盐的双水相体有利于清除蛋白质等难与多糖分离的杂质[16]。因此，综合考虑选用乙醇/Na2CO3作为后续实验的双水相萃取体系。