《表1 代表性商品化昆虫杆状病毒表达载体系统汇总》

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《昆虫杆状病毒表达载体系统在疫苗研究中的应用进展》

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近年来，为提高分泌蛋白的表达量，研究人员陆续开始探索新的技术和应用。例如在杆状病毒基因组中敲除v-cath和chiA基因，它们的缺失会增加分泌及膜靶向蛋白的产生，同时可显著延长宿主细胞的存活期[19-20]，BestBacTM、BacMagicTM、flash BACTM等商品化BEVS均采用此技术。本实验室前期研究也发现，敲除基因后的重组杆状病毒对流感病毒的血球凝集素蛋白（Hemagglutinin，HA）和人类获得性免疫缺陷病毒包膜糖蛋白Gp140的分泌表达具有明显提升作用。此外，有科学家利用病毒锚蛋白（Viral ankyrin/Vankyrin）共表达技术与可持续表达锚蛋白的细胞系进行目的蛋白的表达情况监测，研究结果表明此技术能有效调控病毒感染后的细胞凋亡过程，外源蛋白的表达周期可延长至6 d，同时目的蛋白的产量显著增加，相关载体pAcVE.02/03及细胞系VE-CL02均已商品化[13]。针对种类多样的BEVS，部分研究学者研发出了MultiBacTM与biGBacTM表达体系，它们均可通过多基因片段串联技术表达携带有多个亚基的蛋白复合体，这为解析蛋白质分子结构及相关生物学功能研究提供了很大支持[21-23]。2016年，Martínez-Solís等通过研究启动子相关功能，发现当orf46启动子与ph启动子连用或将p10启动子、OpIE2启动子与第五同源区段（Homologous region 5，hr5）串联使用时，会使目的蛋白的表达量大幅提升[24-25]。2018年，Zhang等向AcNPV相关载体中插入了一段可靶向凋亡蛋白酶1（Caspase 1）的短发卡型RNA（Short-hairpin RNA），抑制了细胞凋亡，外源蛋白表达量明显增加[26]。目前，应用较为广泛的商品化BEVS的相关信息见表1。