《表1 P16、P21及内参基因引物序列》

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《昆布多糖对D-半乳糖诱导的衰老小鼠肝损伤的保护作用及其分子机制研究》

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逆转录:稀释总RNA浓度至1μg/μL作为模板RNA。在冰上准备预混合液:5×BU-Script buffer4μL，dNTP mix（10 mmol/L）1μL，25 pmol/μL Random primers 1μL，20 U/μL RNase Inhibitor 1μL，200 U/μL BU-Script Reverse Transcriptase 1μL，RNase-free H2O 11μL。将上述混合液混匀，在振荡器上轻微震荡5 s，离心，置冰上。向预混合液加入RNA模板1μL，反应体系总共20μL。程序如下:30℃10 min，42℃60 min，95℃5 min，4℃5 min。将以上混合液混匀，在振荡器上轻微震荡5 s，离心，置冰上。反应体系:SYBR Premix Ex Tap（2×）5μL，PCR Forward primer（10 pmol/L）1μL，PCR Reverse primer（10 pmol/L）1μL，ROX Reference DyeⅡ（50×）0.2μL，cDNA1μL，ddH2O 1.8μL充分混匀（总体积为10μL），将混合液置于PCR仪中，先95℃30 s，后95℃5 s，60℃30 s，共40个循环。P16、P21引物序列见表1。