《表1 小鼠TNC基因及内参引物序列》

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《腱糖蛋白C在脓毒症小鼠模型及细胞模型中的表达》

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采用反转录聚合酶链反应法。取小鼠肝、心、肺、肾组织样本各称取30mg，加入Trizol试剂500μl，充分匀浆，使组织充分裂解；加入Trizol试剂500μl和氯仿200μl，震荡混匀至粉红色，静置5min，4℃12 000g离心15min，转移上清液至新的无酶EP管；加入等体积异丙醇，充分混匀，室温下静置10min，4℃12 000g离心10min，弃上清液；加入预冷的75%无水乙醇1ml洗涤沉淀，4℃7500g离心5min，弃上清液，干燥；根据沉淀量的多少加入DEPC水20～30μl，4℃冰箱过夜充分溶解。使用One Drop分光光度计测定RNA样品OD260/OD280比值及浓度，均在1.80～2.00则表示RNA纯度较高。使用HiSCRiptⅡQ RT SuperMix配置逆转录体系将RNA逆转录为cDNA。按照SYBR qPCR Master Mix配置反应体系，预变性95℃30s，循环反应95℃10s，60℃30s，40个循环；熔解曲线95℃15s，60℃60s，95℃15s。根据CT值分析，使用内参基因GAPDH计算TNC mRNA相对表达量。根据文献设计小鼠TNC和GAPDH引物（由南京一道生物科技有限公司合成），见表1。