《表1 糖代谢相关基因qRT-PCR引物序列》

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《烟叶发育过程中糖代谢相关酶活性及基因的表达分析》

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采用改良CTAB法[12]提取样品内总RNA，通过随机引物法反转录合成cDNA[13]。从GenBank核酸数据库中检索烟草蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶和蔗糖转化酶序列，利用Roche LCPDS2设计引物，引物列表见表1。其中烟草核糖体蛋白基因L25作为内参基因。使用Hi ScriptⅡqRT SuperMixⅡ试剂配制反应体系于PCR仪（ABI9700）中合成第一链cDNA。按照Invitrogen公司的Real Master Mix（SYBR Green）试剂盒操作指导，采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法检测基因的相对表达量。反应程序为:95℃预热5 min，95℃变性10 s，60℃退火30 s，循环40次。每个样品均设置3次重复，采用2-ΔΔCt算法[14]对实验结果进行分析。