《表1 PCR引物序列：IRPA对β-内酰胺酶类抗菌药物主要耐药机制研究》

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《IRPA对β-内酰胺酶类抗菌药物主要耐药机制研究》

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采用细菌基因组DNA快速抽提试剂盒提取细菌DNA作为PCR模板，提取完成后置-20℃备用。PCR分别扩增铜绿假单胞菌5种金属β-内酰胺酶（MBLs）基因———IMP、VIM、SIM、GIM、SPM，6种超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因———TEM、VEB、SHV、PER、OXA-2、OXA-10，引物序列、相关参数及参考文献见表1。PCR扩增体系采用50μL体系:TE buffer 5μL，dNTP 4μL，上、下游引物各1μL，Taq酶0.25μL，DNA模板2μL，ddH2O 36.75μL。PCR扩增条件如下:金属酶，94℃预变性5min，然后94℃30s→退火30s→72℃60s，循环40个周期，最后72℃延伸7min，具体退火温度见表1。ESBLs:扩增产物>500bp，93℃预变性2min，94℃60s→55℃退火60s→72℃延伸60s，共35个循环，最后72℃延伸5min；PCR产物<500bp，93℃预变性5min，93℃30s→55℃退火30s→72℃延伸30s，共35个循环，最后72℃延伸5min。PCR扩增产物加入10μL 6×DNA loading buffer，经1%琼脂糖凝胶，120mV电泳30～40min，紫外灯下观察结果，出现与目的条带大小一致即认为阳性，拍照保存，切胶回收。