《表1 PCR引物序列：儿童分离流感嗜血杆菌的耐药性及β-内酰胺酶基因分型》

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《儿童分离流感嗜血杆菌的耐药性及β-内酰胺酶基因分型》

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采用煮沸法提取流感嗜血杆菌DNA:取流感嗜血杆菌混匀于0.5 m L生理盐水中，浓度高于1麦氏浊度单位，悬液于100℃10 min，冷却后13 800×g离心1 min，取上清液，即为DNA模板，-20℃保存。流感嗜血杆菌β-内酰胺酶TEM-1和ROB-1基因引物、PCR扩增条件和β-内酰胺酶基因分型方法参考文献[2-3]。引物序列见表1，由上海生工生物工程公司合成，。PCR扩增反应体系50μL，包括10 mmol/L dNTP 4μL，10×buffer 5μL，Taq DNA聚合酶1μL，上、下游引物（20μmol/L）各1μL，DNA模板2.5μL，ddH2O35.5μL。扩增条件:94℃10 min；94℃45 s，54℃45 s，72℃45 s，30个循环；72℃10 min。扩增产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳后观察结果。部分PCR扩增产物送上海赛音生物技术公司测序。测序结果在GenBank数据库中网上查询比较，进行Blast比对分析。