《表1 引物列表：高糖环境对大鼠髓核细胞基质代谢的影响》

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《高糖环境对大鼠髓核细胞基质代谢的影响》

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将髓核细胞以1×105个/m L的密度种于6孔板中，用含不同浓度（5、15、25 mmol/L）葡萄糖的DMEM培养基培养24 h。吸弃培养液，PBS洗3遍。使用Trizol法提取总RNA，DEPC水溶解，使用紫外分光光度计检测RNA浓度。按照反转录试剂盒说明，冰上操作，每1μg RNA加入4μL反转录混合试剂，补DEPC水使总体积至20μL，然后按照37℃15 min、85℃5 s的条件行反转录。以制备的cDNA为模板，以GAPDH为内参基因，进行Real-time PCR。使用BLAST设计引物（表1）。冰上操作配置20μL PCR反应体系:SYBR酶10μL、上下游引物各0.4μL、ROX DyeⅡ0.4μL、DNA模板2.0μL、DEPC水6.8μL。PCR反应条件:95℃30 s，95℃5 s，60℃34 s，共40个循环；溶解曲线:95℃15 s，60℃1 min，95℃15 s。使用2-ΔΔCT法计算目的mRNA表达水平。实验重复3次。