《表1‘库尔勒香梨’psi-miR159家族qPCR引物》

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《‘库尔勒香梨’miR159家族成员进化特性及表达分析》

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用EASYspin Plant microRNA Kit（艾德莱）试剂盒提取总RNA，用Mir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit（TakaRa）进行miRNA的反转录，利用Primer 5.0软件对psi-miR159a、psi-miR159b的序列设计qPCR的上游引物，下游引物为反转录试剂盒中的通用下游引物（表1）。采用SYBR qPCR技术，对‘库尔勒香梨’花初花期、盛花期、末花期的S＿e、T＿e、T＿z、S＿z共12个样品进行实时荧光定量检测，利用SYBR Green Realtime PCR Master Mix荧光染料在CFX96 touch系统采集荧光信号，每个反应3次重复，相对表达量采用2-ΔΔCt法。选用U6为内参基因，结果用SPSS 17.0进行方差分析（p<0.05），使用Excel2010作图。