《表1 四种改良CTAB法提取的甘蔗基因组DNA的质量比较》

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《用于克隆及分子标记分析的甘蔗高质量基因组DNA提取方法》


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四种改良CTAB法提取出来的甘蔗基因组DNA的浓度和纯度通过Quawell Q3000紫外分光光度计检测。方法一在沉淀DNA前使用了一次氯仿抽提,所得DNA的最终浓度为270 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.733和1.946,这两个比值分别未超过1.8和2.0,表明方法一提取得到的甘蔗基因组DNA存在较轻的蛋白质和多糖污染。方法二在沉淀DNA前使用了两次氯仿抽提,所得DNA的最终浓度为210 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.733和2.024。其中,A260/A280的比值未超过1.8,而A260/A230的比值刚刚超过了2.0,表明方法二提取得到的甘蔗基因组DNA存在较轻的蛋白质污染但无多糖污染。方法三在沉淀DNA前使用了一次氯仿和一次平衡酚抽提,所得DNA的最终浓度为288 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.803和2.237,这两个比值分别超过1.8和2.0,表明方法三提取得到的甘蔗基因组DNA不存在蛋白质和多糖污染,但该方法有利用到强腐蚀性的平衡酚,不安全环保,故不建议;方法四在沉淀DNA前使用了一次平衡酚抽提,所得DNA的最终浓度为241 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.812和2.142,这两个比值分别超过1.8和2.0,表明方法三提取得到的甘蔗基因组DNA不存在蛋白质和多糖污染,但有利用到强腐蚀性的平衡酚,不安全环保,故也不建议(表1)。