《表1 四种改良CTAB法提取的甘蔗基因组DNA的质量比较》
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《用于克隆及分子标记分析的甘蔗高质量基因组DNA提取方法》
四种改良CTAB法提取出来的甘蔗基因组DNA的浓度和纯度通过Quawell Q3000紫外分光光度计检测。方法一在沉淀DNA前使用了一次氯仿抽提,所得DNA的最终浓度为270 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.733和1.946,这两个比值分别未超过1.8和2.0,表明方法一提取得到的甘蔗基因组DNA存在较轻的蛋白质和多糖污染。方法二在沉淀DNA前使用了两次氯仿抽提,所得DNA的最终浓度为210 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.733和2.024。其中,A260/A280的比值未超过1.8,而A260/A230的比值刚刚超过了2.0,表明方法二提取得到的甘蔗基因组DNA存在较轻的蛋白质污染但无多糖污染。方法三在沉淀DNA前使用了一次氯仿和一次平衡酚抽提,所得DNA的最终浓度为288 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.803和2.237,这两个比值分别超过1.8和2.0,表明方法三提取得到的甘蔗基因组DNA不存在蛋白质和多糖污染,但该方法有利用到强腐蚀性的平衡酚,不安全环保,故不建议;方法四在沉淀DNA前使用了一次平衡酚抽提,所得DNA的最终浓度为241 ng/μL,所得DNA的A260/A280和A260/A230分别为1.812和2.142,这两个比值分别超过1.8和2.0,表明方法三提取得到的甘蔗基因组DNA不存在蛋白质和多糖污染,但有利用到强腐蚀性的平衡酚,不安全环保,故也不建议(表1)。
图表编号 | XD0031225200 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.01.28 |
作者 | 刘俊仙、熊发前、刘菁、罗丽、丘立杭、刘丽敏、吴建明、刘红坚、刘欣、卢曼曼、何毅波、李松 |
绘制单位 | 广西农业科学院甘蔗研究所农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室广西甘蔗遗传改良重点实验室、广西农业科学院经济作物研究所、广西农业科学院经济作物研究所、广西农业科学院甘蔗研究所农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室广西甘蔗遗传改良重点实验室、广西农业科学院甘蔗研究所农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室广西甘蔗遗传改良重点实验室、广西农业科学院甘蔗研究所农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室广西甘蔗遗传改良重点实验室、广西农业科学院甘蔗研究所农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室广西甘蔗 |
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