《表2 相关基因的引物序列》
采用Trizol法提取组织中总RNA,并用TaKaRa试剂盒将总RNA反转录为cDNA,荧光定量PCR过程采用TaKaRa荧光定量试剂盒进行(所需引物参照Fu等[10],见表2)。PCR具体过程参照Wang等[11]研究所描述,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)为内参基因进行校正,反应体系为20μL,其中SYBR 10μL、上游引物(F)0.5μL、下游引物(R)0.5μL、cDNA 2μL、灭菌水7μL。反应条件为:预变性(50℃,2 min;95℃,10 min),1个循环数;PCR(95℃,15 s;60℃,1 min),40个循环数;熔解曲线(95℃,15 s;60℃,1 min;95℃,15 s),1个循环数。采用2-ΔΔCt方法对目标基因mRNA的相对表达量进行定量。
图表编号 | XD0030380200 严禁用于非法目的 |
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绘制时间 | 2019.01.01 |
作者 | 张斌、李福昌、王诚、刘汉中、余志菊、刘磊 |
绘制单位 | 山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室、山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室、山东健源生物科技有限公司、四川省草原科学研究院、四川省草原科学研究院、山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室 |
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