《表2 不同标记时间和不同FITC标记缓冲液浓度梯度下线虫存活率》

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《根结线虫活体染色条件的优化》

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注:不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。

FITC的应用十分广泛，是一种常用的荧光探针，主要用于标记多糖、多肽等[8]，对线虫的染色试剂有很多，例如甲苯胺蓝，番红-固绿等，但是这些主要针对死线虫，对于活体线虫的标记时，FITC是主要的荧光染料。根据前人的研究，在染色缓冲液条件为:FITC:0.1 mg/mL，0.5%间苯二酚和30mmoL章鱼胺盐酸盐，染色6h，线虫被标记的荧光很亮[7]，但其未检测存活率，我们在该浓度下标记的线虫亮度和前人研究相一致（如图2，A6h），但线虫存活率很低，几乎为0（如表2），线虫存活是后续研究所需的最基本的条件，因此，在我们的研究中发现，通过降低FITC、间苯二酚、以及章鱼胺盐酸盐的浓度和缩短染色时间，可以提高线虫的存活率。在表2中可以发现在标记线虫3h的存活率较高。在保证线虫存活的条件下考虑标记的亮度，因此舍弃了6h的标记时间以及a，b两个缓冲液浓度。可以发现e浓度在标记3h、4h的亮度相对较亮，因此，选择了在e浓度标记3h作为最优的标记条件。在最优的标记条件下被标记的线虫具有入侵植物根尖的活力。因此这个方法降低了染液浓度，缩短了染色时间，增加了线虫的存活率，减少了试剂的用量，可以用于靶向和沉默特定的线虫基因，以改变寄主植物的抗性[9]。