《表2 PCR和测序引物Tab.2 PCR and sequencing primers》

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《基于DNA条形码的桑黄真菌分子鉴定》

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选用ITS、NL、rpb1、rpb2和ef1-α等5个DNA片段，设计7对引物进行桑黄分子鉴定，引物序列信息见表2[13，14，16，17]。PCR扩增的反应体系包括:引物1、引物2和模板各1μL，2×MasterMix 12μL，以重蒸水定容至25μL。为获得更好的试验效果，采用温度梯度PCR。ITS扩增条件为:变性温度94℃，变性时间4min，变性温度94℃，变性时间1min，梯度退火温度分别为55、56、57、58和59℃，退火时间1min，延伸温度72℃，延伸时间1min，35个循环，延伸温度72℃，延伸时间10min。其他序列扩增条件:变性温度94℃，变性时间3min，变性温度94℃，变性时间1min，梯度退火温度分别为49、50、51、52和53℃，退火时间30s，延伸温度72℃，延伸时间1min，完成35个循环，延伸温度72℃，延伸时间10 min[13，17]。PCR后产物利用1%的琼脂糖凝胶电泳检测，收集对应条带的PCR产物，送生工生物工程（上海）股份有限公司测序。