《表2 AOB、AOA、Comammox Clade A、Comammox Clade B amo A基因的引物序列Table 2 Primers for AOB, AOA, Comammox Cla

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《长期不同施肥量对全程氨氧化细菌丰度的影响》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

首先，采用Fast DNA?SPIN Kit for Soil（MP Biomedicals，LLC）试剂盒、并按试剂盒操作说明提取土壤微生物总DNA，并于-20℃保存待测.随后，采用实时荧光定量PCR法在Quant StudioTM6Flex定量PCR仪（Thermo Fisher Scientific，Singapore）上测定氨氧化细菌（AOB）、氨氧化古菌（AOA）及全程氨氧化菌Comammox Clade A和Clade B amo A基因的拷贝数.AOB、AOA、Comammox Clade A、Comammox Clade B的amo A基因定量PCR所用扩增引物见表2.AOB、AOA、Comammox Clade A、Comammox Clade B的amo A基因定量PCR所用反应体系均为20μL，主要包含:待扩增的模板DNA 1μL、上下引物及ROX染料各0.4μL，Taq DNA聚合酶10μL、灭菌水7.8μL.AOA amo A基因定量PCR扩增条件为:95℃，1.5min；40×（95℃，30 s；55℃，45 s；72℃，45 s with plate read）；Melt curve 60.0℃to 95.0℃，increment0.5℃，0:05+plate read.AOB扩增条件为:95℃，3.0 min；38×（95℃，30 s；60℃，1.5 min with plate read）；Melt curve 60.0℃to 95.0℃，increment0.5℃，0:05+plate read.Comammox Clade A、Comammox Clade B的amo A基因定量PCR扩增条件均为:95℃，3.0 min；45×（95℃，30 s；52℃，45s；72℃，1 min with plate read）；Melt curve 60.0℃to 95.0℃，increment 0.5℃，0:05+plate read.