《表1 引物序列：丰富环境对青春期高脂饮食小鼠认知行为和海马三磷酸腺苷结合盒转运子A7表达的影响》

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《丰富环境对青春期高脂饮食小鼠认知行为和海马三磷酸腺苷结合盒转运子A7表达的影响》

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3组小鼠各取5只，通过RT-qPCR检测另一侧海马组织中ABCA7的表达情况。动物给予七氟烷麻醉后，迅速剥取脑组织，分离海马组织并迅速将组织放入液氮中，然后保存于-80℃冰箱中。每侧海马加入400μL TRIizol，组织用匀浆机低速匀浆1 min后静置于冰上；加入300μL氯仿，上下混匀10 s，在室温下静置10 min，在4℃下以12 000 r/min离心20 min；取上清加至另一对应的EP管，加入500μL异丙醇，在4℃下以12 000 r/min离心10 min；弃上清液后，加入75%乙醇1 mL（用0.1%的DEPC水配制），在4℃下以8 000 r/min离心5 min，此步骤重复两次。弃上清液，在室温下静置，待乙醇挥发后加入30μL0.1%DEPC水，在65℃下放置5 min以溶解RNA。测RNA浓度后，将其保存于-80℃的冰箱中。按照反转录试剂盒说明书进行反转录操作。反转录体系为20μL。将RNA模板、Primer混合液、dNTP混合液、DTT、RT缓冲液、HiFiScript和无酶水加入至反应管，将RNA反转录为cDNA。按照ChamQTM Universal SYBR试剂盒说明书进行qPCR。qPCR反应体系包括5μL SYBR混合液、0.2μL正义引物、0.2μL反义引物、3.8μL无酶水、1μL的cDNA样品。引物序列见表1。PCR反应条件：95℃15 s预变性后，再进行95℃5 s和58℃30 s，在72℃延伸15 s，重复40个循环。最后进行熔解曲线步骤，95℃15 s，60℃60 s，95℃15 s。采用2-ΔΔCt计算基因相对表达量，ΔΔCt=（Cttargetgene-实验组-CtGAPDH-实验组）-（Cttargetgene-Con组-CtGAPDH-Con组）。