《表1 mi RNAs序列》

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《miR-92a与miR-19b对小鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响》


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RPMI-1640培养液、DMEM培养液、DMEM/F12培养液、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)、新生牛血清(newborn calf serum,NCS)和B27细胞培养添加剂购自Gibco;青-链霉素、L-谷氨酰胺和胰蛋白酶购自Hy Clone;重组人胰岛素和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)购自Becton;细胞转染脂质体Lipofectamine RNAi MAX和Lipofectamine 2000购自Invitrogen;总RNA提取试剂Tri Pure和实时荧光定量PCR试剂购自Roche;E.coli Poly(A)聚合酶和ATP购自NEB;脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonucleaseⅠ,DNase I)和核糖核酸酶抑制剂(ribonuclease inhibitor,RRI)购自Ta Ka Ra;反转录试剂盒、抗β-肌动蛋白(β-actin)抗体(HC201-02)、羊抗鼠和羊抗兔辣根过氧化物酶标记的II抗(HS201-01和HS101-01)购自北京全式金生物技术有限公司;Cell Counting Kit-8(CCK8)购自Dojindo Labratories;BCA蛋白浓度测定试剂盒、RIPA蛋白裂解液和Alexa Fluor 555标记的驴抗兔荧光Ⅱ抗(A0453)购自碧云天生物技术研究所;抗胰岛素抗体(sc-9168)购自Santa Cruz;抗Neuro D1抗体(ab60704)购自Abcam;高纯度质粒提取试剂盒购自天根生化科技有限公司;双萤光素酶报告基因检测试剂盒购自Promega;β-巯基乙醇、过硫酸铵、丙烯酰胺、甲基双丙烯酰胺和四甲基乙二胺购自Sigma;甲醇和吐温20等常规生化试剂购自天津天大化学试剂厂。含Neuro D1 3′UTR的萤火虫萤光素酶报告载体和海肾萤光素酶报告载体由东北林业大学发育生物学实验室提供。NC、mi R-92a和mi R-19b由吉玛基因股份有限公司合成,序列见表1。q PCR引物由金唯智基因公司合成,序列见表2。