《表1 荧光PCR检测仪循环参数设定》

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《实时荧光定量PCR法分析复治患者幽门螺杆菌感染及其耐药情况》

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（1）于胃镜下收集患者胃黏膜组织，包括胃窦、胃体两处样本各一块，将标本放于100μLl裂解液中，短期内可4℃保存，若长期保存，需放于-70℃，0℃～8℃运输。委托昆明诺医学检验实验室有限公司检测。核酸抽提或纯化试剂盒、耐克拉霉素、耐喹诺酮及非耐药幽门螺杆菌核酸检测试剂盒均由江苏默乐生物科技股份有限公司提供。（2）对放有样本的裂解液提取或纯化病原体核酸。（3）质控品：试剂盒中强阳性质控品（Hp）、弱阳性质控品（Hp）和阴性质控品（Hp），取50μL上述3种质控品，分别与50μL裂解液混合，95℃加热10min，12000rpm离心10min，转移上清至新的Ep管中，并做好标记。（4）扩增试剂准备：在PCRⅠ室，从试剂盒中取出引物探针和检测缓冲液，在冰上或4℃融化，取出混合酶液，将所有组分轻微摇晃混匀并低速简短离心。每人份按照（检测缓冲液12.5μL、引物探针7.0μL、混合酶液0.5μL）进行PCR反应体系的配置。计算好各试剂使用量，加入一适当体积离心管中，充分混匀，简短离心。PCR反应液的总量应满足的人份数包括：临床样本的个数、1管强阳性质控品、1管弱阳性质控品、1管阴性质控品和1个PCR阴性对照。PCR反应液配置完毕，进行PCR反应液的分装，在每一个PCR反应孔加入20.0μL PCR反应液，分装完毕，转移至PCRⅡ室。（5）加样：在装有PCR反应液的PCR反应孔中加入病原体核酸，每一份核酸的添加量是5.0μL/孔，PCR阴性对照孔中不添加任何样本或核酸。（6）PCR反应：将反应管放入荧光PCR检测仪中，循环参数设定见表1。