《表2 r HuHF诱导表达条件优化正交试验设计与结果》

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《人源重链铁蛋白纯化及其纳米粒制备》

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为了提高rHuHF蛋白的诱导表达量，对发酵罐发酵培养工程菌BL21-pET3a-rHuHF的关键工艺参数进行优化。前期对表达过程的条件进行了单因素试验，并考虑节约发酵过程的能耗，本实验选择工程菌株培养温度37℃、罐内搅拌转速150～250 r/min、空气通量0.8～1.6 L/min、加入IPTG后诱导表达时间8～10 h作为优化范围，所选条件范围内目标蛋白的诱导表达量较多，通过BCA试剂盒定量比较出平均每升发酵液表达目标蛋白量得出最优参数。因为OD600 nm值为1.0时，工程菌的生长进入到平台期[25]，生长速度趋缓，所以选择此时加入诱导剂IPTG，有研究已证明提高大肠杆菌BL21(DE3）的诱导剂终浓度后，杂蛋白表达量也增加[26]且IPTG对细菌有一定毒性[2 7]，故诱导剂IPTG的终浓度确定为0.1 mmol/L。由表2可知，第7次试验所得每升菌液的目标蛋白含量最高，因素优组合为搅拌转速200 r/min、空气通量1.6 L/min、诱导表达9 h，且空气通量为最主要影响因素，故从节约能源和尽量获得目标蛋白考虑，选择试验的中等搅拌转速。综上所述，选择搅拌转速200 r/min、空气通量1.6 L/min、诱导表达9 h为最佳表达条件。