《表1 用户画像基本表：具备定点偶联功能的HBc-VLPs的制备与性质鉴定》

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《具备定点偶联功能的HBc-VLPs的制备与性质鉴定》

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重组质粒pET28a-hbc由实验室构建，构建示意图如图1A所示。基因hbc原始序列参照NCBI GenBank（登录号HE981189.1），由苏州金唯智生物科技有限公司进行序列的合成。根据hbc基因序列设计一对特异性引物与一对突变引物（表1），利用重叠延伸PCR技术，将分别以F-Rm、Fm-R为两组引物，扩增两个突变片段，再以F-R扩增完整的序列。通过连续的3次PCR，将序列中238–240位的GCA突变为TGT（图1B）。反应体系（50μL）:Pfu DNA聚合酶0.25μL、10×缓冲液5μL、dNTPs（2.5 mmol/L）4μL、上、下游引物各1μL、质粒模板1μL、ddH2O 37.75μL。反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸40 s，30个循环；72℃终延伸10 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定，回收目的片段。