《表1 miR-205和miR-39引物序列表》

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《局部晚期鼻咽癌患者血清外泌体miR-205表达与诱导化疗敏感性的临床研究》

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采用miRNeasy Mini试剂盒（德国Qiagen公司）提取总miRNAs。采用All-in-oneTMmiRNA First-Strand c DNA合成试剂盒（美国Gene Copoeia公司）进行逆转录反应合成c DNA（37℃孵育60 min，85℃5 min终止逆转录反应）。然后以c DNA为模板，采用All-in-oneTM miRNA q PCR试剂盒进行实时荧光定量聚合酶链式反应进行c DNA扩增。冰浴中配制20μl PCR反应体系，95℃10 min 1个循环，95℃10 s→60℃30 s→72℃45 s，36个循环，添加熔解曲线，从72℃逐渐增加至95℃。以2-ΔΔCt表示目的基因的相对表达量。2-ΔΔCt≥中位值则为高表达组，否则为低表达组。外泌体miR-205以miR-39作为外参基因（于Trizol裂解后迅速加入秀丽线虫miR-39）。引物序列见表1。