《表3 滤膜法菌落计数结果》

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《基于DNA提取效率校正的数字PCR定量方法》

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注:表3中为滤膜法菌落计数的原始实验数据，取5次重复测量的平均值在表2中进行分析比较。

利用酸水解-HPLC方法，评定了DNA提取效率，结合提取效率校正了数字PCR定量检测的结果，并与滤膜法菌落计数的结果进行了比较，如表2所示。在未考虑提取效率影响的情况下，数字PCR定量结果占滤膜法菌落计数的61.2%，这个差异和提取率的数值61.1%非常接近。说明DNA提取效率会显著影响基于PCR反应的定量结果，如果不考虑提取过程的效率，必然会导致对实际结果的低估。以上述2.4中得到的61.1%的提取效率对数字PCR结果进行校正，校正后的结果与滤膜法菌落计数基本一致，数字PCR约比滤膜法高0.3%。造成这种差异的原因，可能是非常少量的大肠杆菌处于存活但不可培养的状态，不能通过平板培养而被计数。通过对结果的分析，我们观察到:滤膜法菌落计数的变异系数（19.1%，n=25）（见表3）明显大于数字PCR方法（1.51%），说明基于数字PCR的检测方法具有更好的重复性，与此同时，该方法不需要包括细菌培养的过程，显著缩短了检测的时间。在评定DNA提取效率的基础上，建立数字PCR检测方法对大肠杆菌的快速准确测量具有重要的提示意义。