《表2 分子检测引物：云南省主要烟区正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒的调查和检测》

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《云南省主要烟区正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒的调查和检测》

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提取病样的总RNA，利用随机引物进行反转录合成c DNA，利用分子检测引物对进行PCR扩增反应（表2）。PCR反应体系均为20μL，其中30～50 ng/μL DNA样品2.5μL，Taq DNA酶0.3μL，10×PCR Buffer 2.0μL，d NTPs 1.2μL，上下游引物各1.5μLd d H2O 11.0μL。所用试剂购自宝生物公司。PCR反应在Ependorff梯度扩增仪上（Master Cycler）上进行。扩增的程序为：94℃先预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃延伸约10 min，最后，4℃保存；PCR产物采用浓度为1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测。