《表2 荧光定量检测木质素合成通路中关键基因的引物》

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《过表达EPSPS基因提高栽培稻与杂草稻/野生稻杂种后代的木质素含量研究》

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注：本研究使用BIO-RAD CFX96实时荧光定量PCR仪自带系统软件可绘制扩增曲线图，自动截取阈值对应的扩增循环数（Ct值），并通过差值Ct法计算相对定量的表达差异（N为阳性个体中的表达量与阴性个体中的表达量之比值）：N=2-ΔΔCt.

杂种F3转基因阳性（WE1++，WE2++，WR1++和WR2++）和阴性群体（WE1--，WE2--，WR1--和WR2--），在水稻种子萌发水培30d后，分别随机选出18株水培幼苗，6株混样，3个重复，一共144单株．本研究选择的目标基因分别编码苯丙氨酸脱氨酶（PAL）、酪氨酸脱氨酶（TAL）、肉桂酸-4-羟基化酶（C4H）、咖啡酸-5-羟基阿魏酸-O-甲基转移酶（COMT）、阿魏酸-5-羟基化酶（F5H）、4-香豆酸辅酶A连接酶（4CL）、肉桂酰辅酶A还原酶（CCR）、肉桂醇脱氢酶（CAD）、过氧化物酶（POD）．本研究使用天根公司的RNAprep Pure植物总RNA提取试剂盒DP432提取水稻叶片总RNA，使用TaKaRa公司的PrimeScriptTMⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit，以水稻总RNA为模板，反转录合成cDNA．利用Primer Premier 5.0设计荧光定量特异性引物，引物见表2．荧光定量PCR反应体系为：总体积20μL，2×ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix 10μL，引物F（5μmol/L）0.8μL，引物R（5μmol/L）0.8μL，50×ROX Reference Dye 2 0.4μL，cDNA模版2μL，ddH2O6.0μL．荧光定量PCR反应在ABI 7500序列扩增仪上进行，反应程序：50℃5 min；95℃5s，58℃30s，72℃40s共40个循环．