《表2 引物序列：生态湿地中抗生素抗性基因的污染控制研究》

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《生态湿地中抗生素抗性基因的污染控制研究》

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荧光定量PCR在Bio-rad IQ5荧光定量PCR仪（Bio-Rad IQTM5）中进行。荧光定量PCR反应体系放在96孔板中，其中包含7.5μL SYBR溶液，0.3μL ROX溶液，0.3μL摩尔浓度为10 mmol/L的前后引物，4.6μL超纯水，2μL 10ng/μL的DNA样品。引物见表2。反应温度程序为：95℃预变性30s后，进行40个循环扩增（95℃变性5s，退火30s，72℃延伸30s），最后进行55～95℃的熔解曲线分析。每个扩增进行3个技术重复，并采用空白实验来排查误差。基因的绝对丰度由达到荧光阈值时所需的循环数对照标准曲线进行计算。