《表1 酶解液组成：高粱品种BTx623原生质体分离及瞬时表达体系的建立》

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《高粱品种BTx623原生质体分离及瞬时表达体系的建立》

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选取培养12～15 d的无菌BTx623幼苗，称取茎1 g，用刀片将其切成0.5～1.0 mm的碎片放于装有0.6 mol/L甘露醇溶液的50 m L三角瓶中，避光静置20 min，将甘露醇移除后加入10 m L酶解液（表1），混匀后避光放入真空装置，室温下保持30～40 r/min低速摇动，抽真空1 h后继续酶解2～8 h。酶解结束后调整摇床速度至80 r/min维持10 min，加入等体积的W5溶液（2 mmol/L MES、154 mmol/L Na Cl、5 mmol/L KCl、125 mmol/L Ca Cl2，调整p H到5.7）继续摇10 min，用200目的尼龙网过滤到50 m L的离心管中，100×g离心3 min，弃上清，加入0.5～1m L W5溶液重悬，置于冰上备用。