《表5 CPW溶液组成：博落回叶肉组织原生质体的分离条件筛选》

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《博落回叶肉组织原生质体的分离条件筛选》

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博落回原生质体分离的酶系由0.2%的果胶酶（Pectinase Y-23）（Solarbio，北京），0.5%的纤维素酶（Celluase Onozuka R-10）（Solarbio，北京）和0.1%的离析酶（Macerozymo Onozuka R-10）（Solarbio，北京）组成（Lang and Kohlenbach，1982），以CPW溶液作酶液溶剂（Sangon，上海），并加入浓度为5 mmol/L的MES，经0.22μm微孔滤膜过滤灭菌（表5）。我们首先对该实验进行了预实验，了解了各因素一定的范围。为了优化出最终酶溶液中使用的甘露醇浓度，实验限定酶解时间为8 h，酶解温度为28℃，酶液pH值为5.8，设置了不同浓度的甘露醇（0.4mol/L，0.5mol/L，0.6 mol/L，0.7 mol/L和0.8 mol/L）；为了优化酶解时间，实验确定甘露醇浓度为第一步实验的最佳数值，酶解温度为28℃，酶液pH值为5.8，测试了不同的酶解时间（2 h，4 h，6 h，8 h和10 h）；为了优化酶解最适温度，实验确定了甘露醇浓度为第一步实验的最佳结果，酶解时间为第二步实验的最佳结果，酶液pH值为5.8，并测试了酶解溶液的不同温度（26℃，28℃，30℃，32℃和34℃）；为了优化酶解溶液的pH，实验确定了甘露醇浓度为第一步实验的最佳结果，酶解时间为第二步实验的最佳结果，酶解温度为第三步实验的最佳结果，并测试了酶解溶液的不同pH值（5.2，5.5，5.8，6.1，和6.4）。将酶解材料放入15 mL离心管中，按材料:酶液为1∶10的比例加入酶液，按上述条件分别进行黑暗酶解，所有试验重复3次，取平均值。