《表7 毒力基因引物序列：腹泻相关气单胞菌的毒力基因测定及耐药性分析》

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《腹泻相关气单胞菌的毒力基因测定及耐药性分析》

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本研究采用PCR对分离的菌株毒力基因进行检测，通过水煮法提取核酸。将菌株接种在血平板上，在37℃培养24 h，将菌株放入装有无菌水的1.5 m L离心管，然后混匀，煮沸15 min，在10 000 r/min离心15 min，上清液中含有模板DNA，用于PCR扩增。PCR扩增体系共50μL，包括10 mmol/L的上游和下游引物各1μL、100 ng/μL的模板DNA 1μL、5 U/μL的Taq DNA聚合酶、10×Taq Buffer 5μL、2.5 mmol/L d NTP Mix 5μL、DEPC 34.7μL。且对毒力基因引物序列进行统计（表7）。扩增条件如下：95℃预变性10min，94℃变性20 s，60℃退火20 s，72℃延伸3 min，共45个循环；最后72℃延伸3 min。分别取5μL PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶中电泳10 min （电压200 V），然后使用凝胶成像系统分析进行成像。