《表2 反转录反应体系：垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用》

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《垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用》

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（1）反转录：按Taka Ra公司反转录试剂盒说明书（NO.RR047A）操作。去除基因组DNA：按表1成分于冰上配制反应混合液，为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先按反应数+2的量配制Master Mix，然后再分装到每个反应管中，最后加入RNA样品（使用500 ng左右的Total RNA）。混匀，于42℃反应2 min，后置于冰上进行后续的反转录。在冰上配制反应液。按表2成分配置反转录反应体系，分装10μL到每个反应管中。轻柔混匀后立即进行反转录反应；（2）Real-time PCR：按照SYBR Premix Ex Taq(Takara）说明书所述的步骤配制10μL Real-time PCR反应体系，反应体系如表3所示，反应程序如表4所示，引物序列如表5所示。使用ABI7500 System检测，用相对定量的方法进行统计分析。