《表1 反转录程序：缺血后适应对非梗死相关动脉细胞凋亡及相关基因表达影响的研究》

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《缺血后适应对非梗死相关动脉细胞凋亡及相关基因表达影响的研究》

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注:反转录程序:反转录42℃、60 min，热失活95℃、10 min，-20℃保存

（1） RNA提取:组织样本，先取约30 mg组织剪碎，用液氮研磨法研成粉末，加入1 m L裂解液，吹打混匀并转移到无RNA酶的离心管中，室温放置5 min，向离心管中加入预冷的氯仿（200μL氯仿/1 m L Trizol），剧烈振荡15 s，室温放置10 min，离心（4℃，12 000 r）15min；小心吸出上层水相约500μL转移至无RNA酶的离心管中，加入等体积（500μL）的异丙醇，颠倒混匀6～8次，-20℃冰箱放置30 min，4℃，10 000 r离心15 min，可见RNA沉淀；弃上清，650μL 75%乙醇（75%乙醇的配置:1倍的DEPC处理水加3倍的无水乙醇）洗涤沉淀，4℃，8 000 r，离心5 min，弃上清。重复4) 步骤一遍，弃上清，吸净残存乙醇，自然干燥5～10 min；20μL DEPC处理水，溶解RNA，-20℃冰箱保存待用。（2）反转录c DNA:按照试剂盒操作说明书进行以下实验（表1）。（3）实时定量聚合酶链式反应（quantitative real time polymerase chain reaction，qRT-PCR）见表2。采用2-△△CT法分析目的基因在对照组和各实验组之间的表达差异，内参基因为GADPH，计算公式如下:△Ct=Ct目的基因-Ct内参，再求得对照组△Ct的平均值，记为△Ct对照平均，用各实验组的△Ct分别减去△Ct对照平均，求得△△Ct值，即△△Ct=△Ct实验组-△Ct对照平均，再计算各组2-△△CT值，即为各组中基因的相对表达量。