《表1 荆门蜱病毒筛查引物》

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《中国北方地区蜱携带荆门蜱病毒的分子流行特征分析》

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取200μl蜱悬液，参照美国Invitrogen公司TRIzol LS Reagent和E.Z.N.A.RNA isolation Kit(OMEGA）说明书提取RNA。使用one step RT-PCR Kit(TaKaRa，中国大连）试剂盒进行样本RNA中JMTV和类JMTV节段1保守区（S1，主要编码RdRp）的PCR扩增。One step RT-PCR Kit扩增条件为：50℃30 min反转录总RNA为cDNA；94℃预变性3 min，94℃变性35 s，53℃退火35 s，72℃延伸30 s，共35个循环；72℃10 min。以第1轮产物为模板使用Taq DNA聚合酶（TaKaRa，中国大连）进行第2轮巢式PCR扩增。Taq DNA聚合酶扩增条件：94℃预变性3 min；94℃变性35 s，53℃退火35 s，72℃延伸30 s，共35个循环；72℃10 min。筛查引物参照文献[4]（表1）。根据初筛结果进一步进行JMTV全基因组扩增。PCR产物用QIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen，美国）纯化后送生工生物工程（上海）有限公司采用标准Sanger测序法直接测序，所有测序数据使用Seqman进行组装。