《表4 用于TaqMan微流控阵列灵敏度检测的DNA样品组合》

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《利用TaqMan微流控阵列同步检测多种动物源性成分》

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括号中的数值表示每个组合中各物种的DNA在该列每个反应孔中的样品质量浓度。

比较TaqMan微流控阵列和单重荧光定量PCR(IRTP）的检测灵敏度。考虑到一个DNA样品中涉及的物种越多，不同的DNA间会存在竞争和干扰，从而影响目标物种PCR反应的扩增效率，因此，在对微流控阵列进行灵敏度验证时，我们采取了如表4所示的加样组合，使一个加样孔中涉及的物种减少至5～6种，但若再减少物种数量，则一块加样板内无法检测所有的目标基因，且检测成本也会增大。设置的质量浓度低限参考IRTP的检测低限，根据该物种在IRTP中的检测低限，设置1个检测值，同时再设置一个高于该值1个数量级的检测值，以黄牛检测为例，设置了0.01 ng/μL(IRTP的检测低限值）和0.1 ng/μL（高于检测低限1个数量级的值）2个值。只有“马”和“狗”例外，这2个物种的IRTP检测低限都为1.0 ng/μL，但设置的检测值为1.0和0.1 ng/μL。这一方面是由于检测用的微流控阵列板的数量有限，另一方面是在进行重复性和特异性验证时使用的质量浓度为10 ng/μL，因此可直接借鉴该结果。微流控阵列的加样质量浓度如表4所示，同一质量浓度下重复4次检测（1块板内重复2次，检测2块板），检测得到的CT≤35时为阳性，4次中3次或3次以上结果为阳性，表示可检测到该质量浓度。