《表6 TaqMan微流控阵列特异性验证》

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《利用TaqMan微流控阵列同步检测多种动物源性成分》

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特异性结果检验显示，TaqMan微流控阵列有较高的特异性，24种（类）物种中，有22个（类）物种的检测既没有出现假阴性也没有出现假阳性，只有2个物种出现了假阴性，整个实验过程没有发现假阳性。特异性的验证往往基于对大量近似物种的检测，如检测黄牛的引物探针的特异性时，往往需要检测水牛、牦牛、山羊、绵羊等同科同属的近似种是否存在假阳性。本研究应用的标准中的引物探针及本研究研发的引物探针，在进行单重荧光定量PCR时已经对该引物探针是否存在假阳性进行了验证。将单重荧光定量PCR整合成微流控阵列后，对某一个引物探针而言产生假阳性的物种一般不会因此增多。但在检测骆驼和鸽时，出现了假阴性，假阴性率分别达到了16.7%和25%。假阴性的出现，可能是由加样操作失误造成的。如在检测骆驼时，在同一列的2个平行样中，出现了假阴性，这很有可能是加样失误造成的；而在鸽的检测时也出现了假阴性，这可能是操作失误引起的，也可能是引物本身灵敏度不太高导致的。如表6所示，检测鸽得到的CT值都在33左右，而实验设定大于35即为阴性。虽然鸽的假阴性和引物灵敏度低有关，但比较单重荧光定量PCR，在同样的DNA检测浓度下，重复3次并没有出现假阴性，说明TaqMan微流控阵列方法较普通单重荧光定量PCR检测的灵敏度低。