《表1 miR-10b mimics/NC序列》

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《miR-10b对牛卵巢颗粒细胞凋亡的影响》

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在转染前1 d，将细胞接种至60 mm板中（1×106个/孔），加入含有10%胎牛血清的培养液，保证其在第2天细胞密度达到70%～90%。分别使用1 250μL DMEM/F12稀释500 pmol miR-10b mimics和mimics NC并混匀，序列见表1。1 000μL DMEM/F12稀释20μL LipofectamineTM 2 000，混匀并室温静置5 min。将前两步的预混液混合，室温孵育20 min。用PBS冲洗细胞3次，每板加入混合液并加入DMEM/F12补充至4.5 mL，轻晃混匀，37℃，5%CO2培养箱培养。6 h后每板加入500μL胎牛血清，继续培养至48 h，提取RNA和蛋白用于后续检测。