《表1 PCR引物参数：牦牛MBL2基因mRNA及相关miRNAs在不同组织中的表达分析》

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《牦牛MBL2基因mRNA及相关miRNAs在不同组织中的表达分析》

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在NCBI中查找目的基因MBL2的参考序列信息，用Primer premier 5.0软件进行引物设计（表1），内参基因β-actin参照王玉恒等[18]的引物设计。PCR反应体系中RT-PCR产物0.4L、上游和下游引物（浓度10mol/L）各0.4L、Premix Taq 4L、dd H2O 4.8L。滴加少许石蜡油，以防止挥发。PCR反应条件：94℃预变性5 min，扩增循环数为40个（94℃45 s，60℃45 s，72℃45 s)，72℃延伸10min，4℃保存。2%琼脂糖凝胶电泳分离产物，用割胶仪割取目的胶条，将含有目的基因片段的胶条用凝胶回收试剂盒回收纯化，并进行克隆测序。RT-PCR产物用8%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，银染照胶（美国Bio-Rad凝胶成像系统）。利用Quantity One V4.52软件对内参基因β-actin及目的基因MBL2目的条带进行灰度体积分析（MBL2基因灰度值/β-actin基因灰度值），得到MBL2基因在10种组织中的相对表达量，试验重复3次。