《表1 质粒pM A5-lap-dal(AmpR,Ori)-分离稳定性》

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《食品级高产亮氨酸氨肽酶重组Bacillus subtilis的构建和发酵优化》

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如果质粒分离稳定性较差，会发生严重的质粒丢失现象，导致发酵后期质粒丢失的菌株成为优势菌种，从而严重影响目的蛋白表达量[21]。由表1可知，BS168（dal）-/p MA5-lap-dal（AmpR，Ori）-在LB+D-丙氨酸培养基中，第60代以前质粒基本可以保证正常的传代，然而到80代时质粒出现严重的丢失现象，传代至100代，质粒保持率仅为57%。而在LB培养基中培养，传代100代，质粒仍保持良好。这可能是由于普通LB培养基中对BS168（dal）-存在着强有力的筛选压力，质粒一旦丢失，则菌株无法正常生长。而在LB+D-丙氨酸的培养基中不存在筛选压力，无法维持质粒长期分离稳定性。