《表1 PCR引物序列:左归丸对妊娠糖尿病大鼠血清相关指标及胰腺PDX-1表达的影响》

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《左归丸对妊娠糖尿病大鼠血清相关指标及胰腺PDX-1表达的影响》


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大鼠胰腺组织匀浆后,依照试剂盒说明进行总RNA提取,取各组RNA样本置于离心管中,用ddH2O定容至12 L,于PCR仪上65℃保温5 min,迅速置冰上冷却,依次加入5×Reaction Buffer 4μL,10 mmol·L-1dNTP Mix 2μL,RiboLock RNAase抑制剂1μL和RevertAi M-MuLV逆转录酶1μL,混匀,于Real-time PCR仪上42℃保温60 min,结束后80℃保温5 min灭活反转录酶;按试剂说明书配制Real-time PCR反应体系,放入扩增仪中,反应条件为95℃预变性10 min,95℃变性15 s,60℃退火60 s,共40个循环。采用2-ΔΔCt法表示PDX-1的mRNA相对表达量。引物序列由武汉赛维尔生物科技有限公司设计合成,引物序列见表1。