《表4 疑似菌株的toxR基因序列Blasten结果》

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《北部湾茅尾海副溶血性弧菌的分离鉴定与致病性分析》

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对上述20个疑似V.p进行toxR基因PCR扩增，电泳检测结果如图3所示，所有样品均出现目标条带。所有20个PCR产物测序结果在NCBI网站进行BLAST比对，发现它们均与V.p的toxR基因具有非常高的一致性，有18是100%，其余2个是99%（表4）。通过系统进化树分析（图4）和基因的遗传距离分析（表5）结果显示，在遗传距离0.006水平上，可以分为6个Clusters(Cluster A～Cluster F，图4）。YSVP01、YSVP03、YSVP06、YSVP07、YSVP08、YSVP09、YSVP11、YSVP12、YSVP14、YSVP15、YSVP16和YSVP19与V.p（登录号为MG873152.1，CP034565.1，MF983557.1）聚为1个分支，为Cluster A；YSVP17和YSVP18为Cluster B；YSVP02和YSVP13与V.parahaemolyticus(MG873153.1）聚为1个分支，为Cluster C；YSVP04与V.parahaemolyticus(KT194120.1）聚为1个分支，为Cluster D；YSVP05和YSVP20与V.parahaemolyticus(CP028342.1）聚为1个分支，为Cluster E；YSVP10与V.parahaemolyticus(KT194144.1）聚为1个分支，为Cluster F。各个分支内部，菌株两两之间的toxR基因序列遗传距离都为0.000；各个分支之间的遗传距离为0.006～0.025之间。以上分析结果表明，特异功能基因toxR比16S rDNA序列有着更好的分类分辨率，更适合于海洋副溶血性弧菌的分类鉴定[27，34-36]。因此，这两种方法的相互验证，可以显著提高菌株分离鉴定的准确度。