《表1 近五年报道的具有区域选择性的NHase》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《腈水合酶区域选择性与对映选择性的研究进展》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

近年来，研究人员虽然已经分离出了一些含有区域选择性NHase的菌株（表1），但对于NHase展现出区域选择性的原因还未有定论，且通过蛋白质工程手段改造NHase对于二腈类底物区域选择性的研究也较少。最近，Cheng等通过序列比对方式，发现来源于睾丸酮丛毛单胞菌C.testosteroni 5-MGAM-4D的NHase与来源于恶臭假单胞菌Pseudomonas.Putida NR-RL-18668的NHase具有95%以上的序列相似度，但两者对于二腈类底物的区域选择性完全不同。通过同源建模、底物通道计算等计算机技术的辅助，研究人员发现了位于NHase底物通道上的βPhe37关键氨基酸残基，该位点可以作为“开关”调控NHase的区域选择性。在该位点进行定点突变可以翻转该酶对于脂肪族二腈类底物的区域选择性[29]。除此之外，Cheng等通过分子对接与分子动力学模拟，定位了NHase底物结合口袋中潜在影响NHase区域选择性的关键氨基酸残基，并基于迭代饱和突变，筛选到βY68T/W72Y优势突变体，该突变体较野生型NHase展现出完全相反的区域选择性[30]。这些发现阐明了NHase底物通道及底物结合口袋构成氨基酸对于NHase催化二腈类底物区域选择性的关键作用，可以为今后改造NHase催化其他含有两个以上腈基的腈类底物的区域选择性提供一定的理论依据。