《表1 螺杆菌属和种PCR检测引物》

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《实验树鼩肠道螺杆菌属细菌特征分析》

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按照参考文献（Goto et al.2000，Wu et al.2017）和标准（T/CALAS24-2017，中国实验动物协会2017）设计并合成引物（硕擎生物科技有限公司，昆明），进行PCR扩增和检测（表1）。螺杆菌属特异性引物检测采用巢氏PCR法进行，第一轮扩增采用HB-1st引物，第二轮扩增采用HB-2nd引物，以第一轮扩增产物稀释10倍作为第二轮扩增的模板进行。PCR扩增体系为20μl，其中Premix Taq(Takara，日本）10μl，无酶水（Ambion，美国）8μl，上下游引物各0.5μl，模板DNA 1μl(20 mg/L）。扩增条件为：94℃5 min；94℃30 s，55℃30 s，72℃30 s，共30个循环；最后72℃10 min。扩增产物以1.5%的琼脂糖凝胶（Biowest，西班牙）进行电泳，Goldview核酸染料（Solarbio，中国）染色，凝胶成像仪（Gel Doc 2000，Bio-Rad，美国）判定结果。