《表1 引物设计:山东省3家鹦鹉养殖场多瘤病和喙羽病的病原检测与序列分析》

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《山东省3家鹦鹉养殖场多瘤病和喙羽病的病原检测与序列分析》


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对试剂盒提取的DNA,用特异性PCR检测PBFDV。检测体系为20 uL,包括:10μL 2×PCR Master Mix、1.5μL Rep-F上游引物(10μmol/L)、1.5μL Rep-R下游引物(10μmol/L)、2μL DNA模板,加PCR级无菌水至20μL。PCR反应条件为:预变性94℃3 min;94℃30 s,53℃30 s,72℃2 min,30个循环;72℃充分延伸10 min。PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳在UV下观察。样品cDNA使用通用引物进行H9N2亚型禽流感和NDV的PCR鉴定,反应条件及体系同PBFDV的方法,引物使用H9N2及NDV的鉴定引物(表1)。