《表2 p27引物列表：Musashi1基因调控结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的机制研究》

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《Musashi1基因调控结肠癌HCT116细胞恶性生物学行为的机制研究》

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PubMed检索显示，p27 mRNA的3’-UTR区可能存在M s i 1的潜在结合位[（G/A)UnAGU，n=1～3][8]。用Primer 5软件设计p27引物，详见表2，扩增出p27的3’-UTR野生型（wild type，WT）和突变型（mutant，MU）片段，将p27 mRNA3’-UTR中Msi1的两个结合位点由WT1(ATAGT）和WT2(GTAGT）突变为MU1(CGCAG）和MU2(AGCAG），再把野生型（WT1和WT2）和突变型（MU1和MU2）分别克隆进入双荧光素酶真核表达载体pMIR-Report（美国Ambion公司）中。检测报告基因质粒与海肾质粒共转染目的细胞，按照LipofectamineTM2000脂质体（美国Invitrogen公司）转染说明操作。转染48 h后加入荧光素酶检测试剂，测定萤火虫荧光素酶的活性，随后加入Stop&Glo试剂测定海肾荧光素酶的活性，相对荧光素酶活性以萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性之比表示。