《表1 引物序列:甲磺酸阿帕替尼通过p53抑制结肠癌细胞HCT116增殖的作用及机制》

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《甲磺酸阿帕替尼通过p53抑制结肠癌细胞HCT116增殖的作用及机制》


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以0、15、30μmol/L阿帕替尼处理HCT116p53+/+、HCT116 p53-/-细胞24 h,随后按照试剂盒说明书提取各组细胞总RNA。以微量分光光度计测RNA浓度,按照试剂盒说明书将RNA逆转录为cDNA,反应条件为:65℃5min;25℃5 min;42℃60 min;70℃5 min。以微量分光光度计测cDNA浓度后按照实时荧光定量PCR试剂盒说明书检测细胞中p53、NF-κB p65、Caspase-3的mRNA表达水平。实时荧光定量PCR反应条件为:95℃2 min;95℃5 s,60℃13s,进行40个循环。引物由美国Invitrogen公司合成,引物序列见表1。以2-??Ct法计算各组细胞目的基因相对表达水平。