《表2 实验使用引物：枫香拟茎点霉B3生物转化花生废弃物合成白藜芦醇》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《枫香拟茎点霉B3生物转化花生废弃物合成白藜芦醇》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

为确定合成过程中GLU、4CL和STS基因的转录水平，本实验设置了2个处理组：在添加花生废弃物的PDB中接种B3（PDB+PS+B3）和未添加花生废弃物的PDB中接种B3(PDB+B3）。在每个取样点收集大约0.1 g真菌菌丝（湿质量），并用蒸馏水洗涤。研磨真菌菌丝并用TRIZOL试剂（Invitrogen，Carlsbad，CA）取总RNA[24]。使用EasyScript RT试剂盒（Trans Gen Biotech）将提取的总RNA合成c DNA。使用real-time PCR仪Step One系统（Applied Biosystems）进行real-time PCR。反应混合液（20μL）包括10μL SYBR Green探针（AceQ qPCR SYBR Green Master Mix(High ROX Premixe），Vazyme）、2μL cDNA模板和上下游引物各0.4μL。基于B3中GLU、4 C L和S T S基因的部分或全长m R N A序列分别设计了特异性引物对（GLU-F-q/GLU-R-q、4CL-F-q/4CL-R-q和STS-F-q/STS-R-q），以B3的β-actin基因作为表达水平的内参基因，具体引物对见表2。real-time PCR程序：95℃预变性5 min；循环反应95℃变性10 s，60℃退火30 s，40个循环；融解曲线：95℃、15 s，60℃、60 s和95℃、15 s。使用标准熔解曲线验证扩增的特异性。使用StepOne software(version 2.0，Applied Biosystems）确定荧光通过循环阈值（Ct）的周期数，这个值被用于表达水平的定量。通过2-ΔΔCt方法分析cDNA样品的相对表达水平。每个样品都设置3次重复。