《表2 引物列表：添加餐厨废油脂培养酵母进行γ-癸内酯生物转化》

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《添加餐厨废油脂培养酵母进行γ-癸内酯生物转化》

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为了构建解脂耶氏酵母酰基辅酶A氧化酶基因pox2过表达菌株，合成由解脂耶氏酵母组成型启动子驱动的pox3U-P-hph-T-P-pox2-T-pox3D表达框。pox3U，pox3D分别位于pox3（Gen Bank accession AJ001301）上游1 840-2 261 bp和下游4 247-4 666 bp区域；P是解脂耶氏酵母胞外碱性蛋白酶基因组成型启动子XPR2（Gen Bank accession KF975902）；hph是潮霉素抗性基因（Gen Bank accession MG680575）；pox2（Gen Bank accession AJ001300）。上述各片段组成的重组表达框通过化学合成并克隆到pUC57空载质粒上（常州基宇生物公司），将质粒转入大肠杆菌中扩大培养，提取质粒经双酶切获得该重组表达框片段，用酵母转化试剂盒（Frozen-EZ Yeast TransformationⅡTM）通过同源重组转入到解脂耶氏酵母G3中，涂布在含有400μg/m L潮霉素的平板上进行初筛，待长出单菌落，转接至含有潮霉素的液体YPD中，28℃振荡（200 r/min）培养48 h，提取酵母基因组，进行PCR鉴定，通过分子鉴定的转化子，使用TAIL-PCR法[22-23]验证插入位点。分子鉴定引物如表2。