《表1.条件性基因敲除部分应用案例》

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《哺乳动物雌性生殖细胞及早期胚胎基因敲除或敲减的方法》

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构建靶基因时需注意两个LoxP序列的位置和方向，若位于同一条DNA链上，且方向相同时，中间部分的核苷酸序列将被Cre重组酶切除，仅在3’端留下一个LoxP位点；若位于同一条DNA链上，但方向相反，则会颠倒两个LoxP位点间的核苷酸序列；若位于两条不同的DNA链或染色体上，Cre重组酶会介导DNA链的交换或染色体易位[6，27]。实验设计中可以根据不同研究目的，选择相应的序列构建方式。另外，打靶载体同源臂长度对打靶效率影响很大，同源重组效率与同源臂的长度成正比[28]。一般认为基因敲除载体的同源臂总长度应为4 kb以上，以5～8 kb之间为宜，以便顺利进行Cre介导的两个同向LoxP位点发生重组[29，30]。