《表2 PCR反应条件：类鼻疽伯克霍尔德菌bopA基因敲除株的构建及生物学特征》

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《类鼻疽伯克霍尔德菌bopA基因敲除株的构建及生物学特征》

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将获得的二倍体菌株接种于Gm抗性的LB培养基中培养过夜，将培养物稀释数倍后涂布于Gm抗性的蔗糖LB固体培养基进行第二次同源重组（图2C），24°C培养48 h。挑取单个菌落分别接种于Gm和Km抗性的LB固体平板上，对GmR、KmS菌株进行PCR扩增，PCR反应体系（50μL）:2×Prime STAR?GC Buffer 25μL，d NTP Mixture 4μL，正、反向引物（10μmol/L）各1μL，模板1μL，Prime STAR?HS DNA Polymerase（2.5 U/μL）0.5μL，DMSO 2μL，dd H2O15.5μL。PCR反应条件见表2，将阳性菌株送生工生物工程（上海）股份有限公司测序，最终获得测序正确的bop A基因敲除BP菌株，命名为BP（Δbop A）。