《表1 菌株检测的标识序列引物》

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《一株蛴螬绿僵菌的分子鉴定》

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以绿僵菌Ma1518基因组DNA为模板，采用真菌通用引物ITS5/ITS4[14]PCR扩增菌株rDNA-ITS序列；采用Pbeta-F/Pbeta-R和PRPB2-F/PRPB2-R[15]引物分别扩增菌株β-tubulin和RPB2序列。引物序列见表1。rDNA-ITS序列、β-tubulin序列和RPB2序列的PCR反应体系都为:2×Taq Mix 10μL，模板DNA 1μL，上下游引物（10mmoL）各1μL，ddH2O 12μL，总共25μL。三个序列的PCR反应程序都为:94℃5 min；94℃30s，56℃30s；70℃30s，共30个循环；70℃延伸5min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，回收纯化，送铂尚生物技术（上海）有限公司测序。分别将rDNA-ITS序列、β-tubulin序列和RPB2序列测序结果通过Blastn程序（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）与在GenBank中的基因序列进行同源性分析。下载常见近缘种的相应序列，以球孢白僵菌Beauveria bassiana相应序列作为外源种，分别用MEGA4.0软件ClustalX方法进行多序列比对，并以邻接法（neigbor-joining method）分别构建分子系统发育树，用Bootstrap对系统树进行检验，1000次重复[16]。