《表1 用Image J软件分析的目的条带和对照条带的灰度》

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《家蚕核型多角体病毒多角体蛋白的多克隆抗体制备及应用试验》

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1) 1、3、5和2、4、6分别为目的蛋白（多角体蛋白）条带和对照条带（看家蛋白）的灰度值分析；1、2，3、4，5、6分别由0.2 mmol·L-1、0.5 mmol·L-1和1.0 mmol·L-1的IPTG诱导。2) 比值1.34、1.54、1.14分别为条带1、条带2，条带3、条带4，条带5、条带6的灰度值之比。1) 1，3，5

原核表达载体p ET32-polh转化大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，接种于LB液体培养基中培养，并用不同浓度的IPTG诱导后，各诱导组分别取1 m L菌液制作总蛋白质样品。对各组总蛋白样品进行SDS-PAGE分析，与未诱导的对照组相比，其他3个经IPTG诱导的试验组的检测样品在50 k D左右出现一条较高浓度的特异诱导表达条带（图1）（p ET32载体标签蛋白约18 k D[19]，多角体蛋白为28.8 k D，融合蛋白的分子质量为46.8 k D） ，并且目的条带与对照条带的灰度分析结果显示，终浓度为0.5 mmol/L的IPTG的诱导表达效果最好（表1）。将0.5 mmol/L IPTG诱导表达的菌液经超声波破碎，离心分离上清与沉淀，做相应处理后与未诱导对照组、总蛋白质一起进行SDS-PAGE电泳，结果显示多角体蛋白在沉淀中含量最高，在上清中含量较低（图2）。0.5 mmol/L IPTG诱导表达的样品再经过Western blot分析，AntiHis抗体可以与PVDF膜上的融合多角体蛋白蛋白的His标签结合，再与HRP标记的二抗结合后，在显色液作用下显示一条特异性的条带，条带的大小与考马斯亮蓝染色所显示的目的条带的大小相当（图3）。试验结果表明Bm NPV的多角体蛋白在大肠埃希菌BL21（DE3）中成功表达。