《表2 实时荧光定量PCR反应体系》

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《LPS胁迫下五个群体菲律宾蛤仔TYR基因在鳃和肝胰腺中表达特性研究》

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根据荧光定量引物设计标准用Premier 5.0设计特异性荧光引物（表1），交由生工生物工程（上海）股份有限公司合成引物，引物退火温度60℃，以β-actin为内参基因。检测TYR基因在鳃和肝胰腺中不同时间的表达情况。使用SYBR?Premix Ex Taq?Ⅱ（TliRNaseH Plus）试剂盒（TaKaRa，大连）在LightCycler?480定量PCR仪（Roche，上海）进行序列扩增，20μL体系，每组进行三次重复（表2）。实验用两步法荧光定量PCR程序:95℃30 s，95℃5 s，60℃30 s，循环40次。将所得结果用2–??Ct法计算分析比较，并进行单因素方差分析（One-way ANOVA），用SPSS22.0进行数据处理。设置P<0.05为表达量差异显著性水平。