《表1 CHIP-qPCR引物序列》

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《赖氨酸甲基转移酶PR-Set7及S-腺苷甲硫氨酸在亚砷酸钠调控人永生化皮肤角质形成细胞碱基切除修复基因H4K20me1修饰中的作用》

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染色质免疫共沉淀（CHIP）收集细胞后用含1%蛋白酶抑制剂的EZ-zyme裂解细胞，收集细胞核；Ey-1ysis重悬细胞，酶解消化细胞核收集裂解的染色体；每个CHIP体系50μl裂解染色体，加入450μl稀释缓冲液（dilution buffer），取5μl(1%）作为input DNA，4℃备用；将H4K20me1目的抗体、正常小鼠IgG抗体（阴性对照）的20μl磁珠（magnetic beads）混匀后加入每个CHIP体系，充分混匀。4℃混悬器过夜进行免疫沉淀；磁力分选器吸附磁珠；分别用低盐、高盐、氯化锂、TE缓冲液清洗磁珠，CHIP洗脱缓冲液洗脱免疫沉淀复合物及input管后，进行DNA纯化得待测的免疫沉淀DNA。实时荧光定量PCR(qRT-PCR）检测免疫沉淀DNA在MPG、PARP1、XRCC1基因启动子区CHIP1、CHIP2区域及编码区CHIP3、CHIP4区域的表达；引物序列见表1。10μl PCR反应体系含5μl iTaq TM Universal SYBR Green supermix(2×）、10μmol/L上下游引物各0.5μl、cDNA1μl、灭菌ddH2O 3.0μl。PCR反应条件：95℃预变性3 min，95℃变性10 s，55℃退火30 s，60℃延伸20 s，共40个循环。扩增完毕后进行熔解曲线分析，每个样本重复检测3次。每次反应均设无模板对照，根据扩增效率和循环（CT）值采用2-ΔΔCT法计算mRNA相对表达量，结果以免疫沉淀DNA/input表示。ΔΔCT=[（暴露组目的基因CT值-暴露组内参基因CT值）-（对照组目的基因CT值-对照组内参基因CT值）]。